13.6 Thö giíi h¹n nhiÔm
khuÈn
Thö giíi h¹n nhiÔm khuÈn nh»m
®¸nh gi¸ sè lîng vi khuÈn hiÕu khÝ, nÊm, mèc cã kh¶ n¨ng sèng l¹i ®îc vµ ph¸t
hiÖn c¸c vi khuÈn chØ ®iÓm y tÕ cã trong thuèc.
ThÝ nghiÖm ®îc tiÕn hµnh trong
®iÒu kiÖn v« khuÈn. Trong khi lµm thÝ nghiÖm, chó ý kh«ng ®a chÊt khö khuÈn
vµo mÉu thö.
Thö nghiÖm ®îc ¸p dông cho tÊt
c¶ c¸c dîc phÈm gåm c¶ nguyªn liÖu vµ thµnh phÈm cña c¸c thuèc kh«ng tiÖt khuÈn trong qu¸ tr×nh
s¶n xuÊt.
T×m
chÊt øc chÕ cã trong thuèc:
Thö nghiÖm giíi h¹n nhiÔm khuÈn
sÏ kh«ng cã gi¸ trÞ nÕu chÊt øc chÕ cã trong thuèc c¶n trë ®Õn kh¶ n¨ng ph¸t
hiÖn c¸c vi khuÈn. V× vËy cÇn lµm thÝ nghiÖm kiÓm tra tríc b»ng c¸ch lÊy dung
dÞch chÕ phÈm ®· ®îc pha ë nång ®é thÝch hîp vµo m«i trêng chän läc cho Escherichia coli, Salmonella,
Staphylococcus, Pseudomonas aeruginosa, råi cÊy vµo ®ã 1ml canh khuÈn 24 h
tuæi ®· pha lo·ng víi dung dÞch ®Öm phosphat pH 7,2 Ýt nhÊt tíi 10-3
c¸c vi khuÈn t¬ng øng. NÕu vi khuÈn kh«ng mäc, thÝ nghiÖm cÇn thay ®æi b»ng
c¸ch:
1. Gi÷ nguyªn lîng chÊt mang
thö nhng t¨ng thÓ tÝch m«i trêng.
2. Cho vµo m«i trêng mét lîng
võa ®ñ chÊt khö ho¹t tÝnh thÝch hîp.
3. Phèi hîp c¸ch lµm (1) vµ (2) ®Ó vi khuÈn mang cÊy cã
thÓ mäc ®îc.
Tuú theo thµnh phÇn vµ nång ®é
cña mÉu thö, cã thÓ thªm vµo m«i trêng ®Ó trung hoµ chÊt øc chÕ c¸c lo¹i sau:
lecithin ®Ëu t¬ng 0,5 %, polysorbat 20: 4 %.
Lµm l¹i thÝ nghiÖm víi ®iÒu
kiÖn chÊt øc chÕ trong lîng mÉu mang kiÓm tra ®· ®îc trung hoµ.
M«i trêng
M«i trêng nu«i cÊy cã thÓ pha
theo c¸ch díi ®©y hoÆc cã thÓ dïng m«i trêng kh« do c¸c h·ng s¶n xuÊt m«i
trêng vi sinh vËt cung cÊp. C¸c m«i trêng tù pha chÕ ph¶i hÊp tiÖt khuÈn b»ng
nåi hÊp ë nhiÖt ®é 115oC trong 30 phót trõ khi cã nh÷ng chØ dÉn
riªng ®èi víi lo¹i m«i trêng ®Æc biÖt.
Th¹ch dïng cho pha chÕ m«i
trêng cã ®é Èm díi 15%. Níc vµ c¸c chÊt dïng trong c¸c c«ng thøc ph¶i tinh
khiÕt.
M«i trêng láng casein lecithin
®Ëu t¬ng polysorbat
|
Casein pancreatic Lecithin ®Ëu t¬ng Polysorbat 20 Níc |
20,0 g 5,0 g 40,0
ml 960
ml |
Hoµ tan casein pancreatic vµ
lecithin ®Ëu t¬ng vµo 960 ml níc, ®un c¸ch thuû ë 48 - 50oC kho¶ng 30 phót cho tan hoµn toµn. Thªm 40 ml
polysorbat 20, trén ®Òu, ph©n chia vµo c¸c dông cô thÝch hîp.
M«i
trêng th¹ch casein ®Ëu t¬ng
|
Casein pancreatic Natri clorid Th¹ch Bét ®Ëu t¬ng thñy ph©n bëi
papain Níc pH sau khi tiÖt khuÈn: 7,3 +
0,2
|
15,0
g 5,0 g 15,0
g 5,0 g 1000
ml |
M«i trêng láng casein ®Ëu t¬ng
|
Casein pancreatic Dikali hydrophosphat Bét ®Ëu t¬ng thuû ph©n bëi
papain Glucose Natri clorid Níc |
17,0
g 2,5 g 3,0 g 2,5 g 5,0 g 1000
ml |
Hoµ tan c¸c chÊt r¾n vµo níc ®un nãng nhÑ ®Ó tan hoµn toµn. §Ó
nguéi dung dÞch ë nhiÖt ®é phßng, ph©n chia vµo c¸c b×nh thÝch hîp ®· tiÖt khuÈn. pH
sau khi tiÖt khuÈn:7,3 + 0,2.
M«i trêng th¹ch muèi - manitol
|
Casein pancreatic Th¹ch Pepton Cao thÞt Natri clorid D - Manitol §á phenol Níc |
5,0 g 15,0 g 5,0 g 1,0 g 75,0
g 10,0
g 0,025
g 1000
ml |
Trén, ®un nãng, khuÊy ®Òu, ®un
s«i kho¶ng 1 phót ®Ó tan hoµn toµn, pH sau khi tiÖt khuÈn : 7,4 + 0,2.
M«i trêng th¹ch Baird - Parker
|
Casein pancreatic Cao thÞt Cao men bia Lithi clorid Th¹ch Glycin Natri pyruvat Níc |
10,0
g 5,0 g 1,0 g 5,0 g 20,0
g 12,0
g 10,0
g 950
ml |
§un nãng, khuÊy ®Òu sau ®un s«i
kho¶ng 1 phót, tiÖt khuÈn, ®Ó nguéi tíi 45 - 50oC, thªm 10 ml dung
dÞch kali telurit 1% v« khuÈn vµ 50 ml nhò dÞch lßng ®á trøng. Trén kü, nhÑ
nhµng rãt vµo c¸c hép.
ChÕ t¹o nhò dÞch lßng ®á trøng
b»ng c¸ch: S¸t khuÈn toµn bé bÒ mÆt qu¶ trøng, ®Ëp vì v« khuÈn qu¶ trøng, lÊy
lßng ®á trøng vµo èng trô chia v¹ch v« khuÈn. Thªm níc muèi v« khuÈn ®Ó cã tû
lÖ lßng ®á trøng so víi níc muèi lµ 3/7. Bá vµo mét cèc khuÊy v« khuÈn, trén
víi tèc ®é lín trong 5 phót.
pH sau khi tiÖt khuÈn 6,8 +
0,2.
M«i trêng th¹ch Vogel – Johnson
|
Casein pancreatic Cao men bia Manitol Natri pyruvat Th¹ch Glycin Lithi clorid Dikali hydrophosphat §á phenol Níc |
10,0
g 5,0 g 10,0
g 10,0
g 16,0
g 10,0
g 5,0 g 5,0 g 25,0
mg 1000
ml |
§un s«i ®Ó hoµ tan c¸c chÊt r¾n
trong kho¶ng 1 phót. TiÖt khuÈn, ®Ó nguéi ®Õn 45 - 500C. Thªm 20 ml
dung dÞch kali telurit 1% v« khuÈn.
pH sau khi tiÖt khuÈn 7,2 +
0,2.
M«i trêng th¹ch cetrimid
|
Gelatin pancreatic Cetrimid (Cetyl trimethylamoni
bromid) Magnesi clorid Th¹ch Glycerin Níc |
20,0
g 0,3 g 1,4 g 13,6
g 10,0
ml 1000
ml |
Hoµ tan tÊt c¶ c¸c chÊt r¾n vµo
trong níc, thªm glycerin. §un nãng, khuÊy ®Òu, ®un s«i 1 phót cho tan hoµn
toµn.
pH sau khi tiÖt khuÈn : 7,2 +
0,2
M«i trêng th¹ch Pseudomonas ®Ó
ph¸t hiÖn Fluorescin
|
Casein pancreatic Peton Dikali hydrophosphat khan Magnesi sulfat (MgSO4.7H2O)
Th¹ch Glycerin Níc |
10,0
g 10,0
g 1,5 g 1,5 g 15,0 g 10,0
ml 1000 ml |
Hoµ tan tÊt c¶ c¸c chÊt r¾n vµo
níc tríc khi thªm glycerin. §un nãng, khuÊy ®Òu, ®un s«i 1 phót cho tan hoµn
toµn.
pH sau khi tiÖt khuÈn: 7,2 + 0,2.
M«i trêng th¹ch Pseudomonas ®Ó
ph¸t hiÖn Pyocyanin
|
Gelatin pancreatic Kali sunfat khan Th¹ch Magnesi clorid khan Glycerin Níc |
20,0
g 10,0
g 15,0
g 1,4 g
10,0
ml 1000
ml |
Hoµ tan c¸c chÊt r¾n trong níc tríc khi thªm glycerin. §un nãng,
khuÊy ®Òu, ®un s«i kho¶ng 1 phót ®Ó tan hoµn toµn.
pH sau khi tiÖt khuÈn: 7,2 +
0,2.
M«i trêng láng lactose
|
Cao thÞt Lactose Gelatin pancreatic Níc |
3,0 g
5,0 g 5,0 g 1000
ml |
Lµm l¹nh rÊt nhanh m«i trêng
sau khi tiÖt khuÈn.
pH sau khi tiÖt khuÈn : 6,9 + 0,2
M«i trêng láng selenit -
cystin
|
Casein pancreatic Natri selenit acid Dinatri phosphat Lactose L- Cystin Níc |
5,0 g 4,0 g 10,0
g 4,0 g
10,0
mg 1000
ml |
§un nãng ®Ó tan hoµn toµn. §un
tiÕp 15 phót n÷a. Kh«ng cÇn tiÖt khuÈn tiÕp theo.
pH sau khi tiÖt khuÈn : 7,0 +0,2
M«i trêng láng tetrathionat
|
Casein pancreatic Calci carbonat Muèi mËt Pepton Natri thiosulfat Níc |
2,5 g
10,0
g 1,0 g 2,5 g 30,0 g 1000
ml |
§un nãng ®Ó hoµ tan c¸c chÊt r¾n. Khi sö dông thªm vµo m«i trêng
dung dÞch gåm: 5,0 g kali iodid vµ 6,0 g
iod trong 20 ml níc. Sau ®ã thªm 10ml dung dÞch xanh brilliant 1% vµ
trén ®Òu. Kh«ng ®un nãng m«i trêng sau khi thªm dung dÞch xanh brilliant.
M«i trêng th¹ch xanh brilliant
|
Pepton §êng tr¾ng Cao men bia Casein pancreatic Lactose Natri clorid Th¹ch §á phenol Xanh brilliant Níc |
5,0 g
10,0
g 3,0 g 5,0 g 10,0
g 5,0 g 20,0
g 80,0
mg 12,5
mg 1000
ml |
§un s«i ®Ó hoµ tan tÊt c¶ c¸c
chÊt r¾n trong 1 phót. ChØ tiÖt khuÈn tríc khi dïng. Rãt vµo c¸c hép Petri vµ
®Ó nguéi.
pH sau khi tiÖt khuÈn: 6,9 +0,2
M«i trêng th¹ch xylose - lysin
- desoxycholat
|
Xylose §á phenol L-Lysin Th¹ch Lactose Natri desoxycholat §êng tr¾ng Natri thiosulfat Natri clorid S¨t (III) amoni citrat Cao men bia Níc |
3,5 g 0,08 g 5,0 g 13,5 g 7,5 g
2,5 g 7,5 g 6,8 g 5,0 g 0,8 g 3,0 g
1000
ml |
§un nãng, l¾c trßn ®Ó trén ®Òu
chÊt r¾n víi níc. Chó ý kh«ng ®Ó nãng qu¸. ChuyÓn ngay vµo b×nh c¸ch thuû vµ
gi÷ ë nhiÖt ®é 50oC. Rãt vµo c¸c ®Üa ngay tríc khi m«i trêng nguéi
hoµn toµn.
pH sau khi tiÖt khuÈn: 7,4 + 0,2
M«i trêng th¹ch bismuth sulfit
|
Cao thÞt S¾t (II) sulfat Casein pancreatic Bismuth sulfit Pepton Th¹ch Glucose Xanh brilliant Dinatri hydrophosphat Níc |
5,0 g
0,3 g 5,0 g
8,0 g 5,0 g 20,0
g 5,0 g
25,0
mg 4,0 g
1000
ml |
§un nãng, l¾c trßn ®Ó hoµ ®Òu c¸c chÊt r¾n víi
níc, kh«ng ®Ó nãng qu¸. ChuyÓn ngay vµo b×nh c¸ch thuû vµ gi÷ ë nhiÖt ®é 500C.
Rãt vµo c¸c ®Üa ®Ó nguéi.
pH sau khi tiÖt khuÈn: 7,6 + 0,2
M«i trêng th¹ch - s¾t - ba
®êng
|
Casein pancreatic S¾t (II) amoni sulfat Pepton Natri clorid Lactose Natri thiosulfat §êng tr¾ng Th¹ch D-Glucose monohydrat §á phenol Níc |
10,0
g 0,2 g 20,0
g 5,0 g 10,0
g 0,3 g 10,0
g 13,0 g 1,0 g
0,025
g 1000
ml |
Hoµ nãng c¸c chÊt r¾n víi níc,
®un s«i mét phót cho tan hoµn toµn. ChuyÓn vµo c¸c dông cô thÝch hîp ®Ó tiÖt
khuÈn.
pH sau khi tiÖt khuÈn: 7,3 +
0,2
M«i trêng Mac - Conkey
|
Casein pancreatic Natri clorid Gelatin pancreatic Th¹ch Pepton Lactose Muèi mËt §á trung tÝnh TÝm tinh thÓ Níc |
1,5 g 5,0 g 17,0
g 13,5
g 1,5 g 10,0
g 1,5 g 30,0
mg 1,0
mg 1000
ml |
Hoµ nãng c¸c chÊt r¾n víi níc,
®un s«i mét phót cho tan hoµn toµn.
pH sau khi tiÖt khuÈn : 7,1 +
0,2
M«i trêng th¹ch Levine - eosin
- xanh methylen
|
Gelatin pancreatic
Dikali hydrophosphat Th¹ch Lactose Eosin Xanh methylen Níc |
10,0
g 2,0 g 15,0
g 10,0
g 0,4 g 0,065
g 1000
ml |
Hoµ tan nãng c¸c thµnh phÇn
gelatin pancreatic, dikali hydrophosphat vµ th¹ch trong níc, ®Ó l¹nh. C¸c
thµnh phÇn cßn l¹i chØ thªm vµo khi sö dông b»ng c¸ch ®un ch¶y m«i trêng råi
thªm vµo theo tû lÖ: Cø 100 ml m«i trêng thªm 5 ml dung dÞch lactose (1:5), 2
ml dung dÞch eosin vµ 2 ml dung dÞch
xanh methylen (1:300). M«i trêng sau khi hoµ trén ph¶i trong.
pH sau khi tiÖt khuÈn: 7,1 +
0,2
M«i trêng th¹ch Sabouraud
|
Glucosa Casein pancreatic Pepton Th¹ch Níc |
40,0
g 5,0 g
5,0 g
15,0 g 1000 ml |
Hoµ tan, ®un s«i cho tan hoµn
toµn.
pH sau khi tiÖt khuÈn : 5,6 + 0,2
M«i trêng th¹ch - khoai t©y -
glucose
NÊu 300 g khoai t©y ®· bãc vá
vµ th¸i nhá trong 500 ml níc cÊt, läc qua v¶i, thªm níc cÊt ®Ó ®îc 1000 ml,
råi thªm vµo c¸c thµnh phÇn sau: th¹ch 15 g; glucose 20 g. Hoµ tan nãng. TiÖt khuÈn. Khi dïng ®un nãng
ch¶y, ®Ó nguéi ®Õn 45oC. §iÒu chØnh m«i trêng b»ng dung dÞch acid
tartric (1:10) ®Õn pH 3,5 + 0,1. Rãt vµo c¸c ®Üa.
Chó ý:
Kh«ng dïng m«i trêng ®un nãng
trë l¹i lÇn thø 2
§Ó øc chÕ vi khuÈn thêng gÆp
mäc trªn m«i trêng ph¸t hiÖn nÊm, mèc vµ men (m«i trêng Sabouraud hoÆc m«i
trêng th¹ch - khoai t©y- glucose) thªm vµo mét lÝt m«i trêng 0,1g tetracyclin hoÆc 50 mg cloramphenicol, lµm
®Òu ngay tríc khi dïng.
Dung
dịch đệm Natri clorid – pepton pH 7,0
Kali dihydro
phosphat 3,56 g
Natri hydro
phosphat 7,23 g
Natri
clorid 4,30 g
Pepton 1,00 g
Nước cất 1000 ml
Có thể thêm chất hoạt
động bề mặt hoặc chất khử tác
dụng kháng khuẩn vào dung dịch này như Polysorbat
80 0,1 đến 1,0%.
Hấp tiệt trùng 1210C
trong 15 phút.
M«i trêng níc thÞt
Cao thÞt 5,0 g
Níc 1000 ml
M«i trêng th¹ch thêng
|
Pepton Natri clorid Th¹ch Níc pH sau khi tiÖt khuÈn |
10,0
g 5,0 g 15 -
20 g 1000
ml 7,4 +
0,2 |
M«i
trêng pepton - natri clorid
|
Pepton Natri clorid Níc pH sau khi tiÖt khuÈn |
10,0
g 5,0 g 1000
ml 7,0 +
0,2 |
M«i
trêng t¨ng sinh cho Clostridia
|
Cao thÞt Pepton Cao men bia Tinh bét dÏ tan Glucose monohydrat Cystein hydroclorid Natri clorid Natri acetat Th¹ch Níc cÊt |
10,0
g 10,0
g 3,0 g 1,0 g 5,0 g 0,5 g 5,0 g 3,0 g 0,5 g 1000
ml |
Hoµ tan th¹ch b»ng c¸ch ®un
nãng tíi s«i, khuÊy ®Òu liªn tôc. HÊp tiÖt khuÈn 121oC trong 15
phót. NÕu cÇn ®iÒu chØnh pH sao cho sau khi tiÖt khuÈn kho¶ng 6,8.
M«i trêng th¹ch
|
Casein pancreatic ThÞt DÞch tim pancreatic Cao men bia Tinh bét ng« Natri clorid Th¹ch bét Níc cÊt |
10,0
g 5,0 g 3,0 g 5,0 g 1,0 g 5,0 g 15,0
g 1000
ml |
Hoµ tan th¹ch b»ng c¸ch ®un
nãng tíi s«i, khuÊy ®Òu liªn tôc. NÕu
cÇn ®iÒu chØnh pH sao cho sau khi tiÖt khuÈn kho¶ng 7,3 + 0,2.
HÊp tiÖt khuÈn 121oC trong 15 phót. Lµm l¹nh tíi 45oC ®Õn
50oC. Khi cÇn cã thÓ thªm 20 mg gentamycin base vµ rãt vµo c¸c hép
Petri.
M«i
trêng sulfit - lactose
|
Casein pancreatic Cao men bia Cystein hydroclorid Natri clorid Lactose Níc cÊt |
5,0 g 2,5 g 0,3 g 2,5 g 10,0
g 1000
ml |
Hoµ tan tÊt c¶ c¸c thµnh phÇn
trong níc vµ ®iÒu chØnh ®Ó cã pH 7,1 + 0,1. §ãng vµo c¸c èng nghiÖm 16
x 160 mm mçi èng 8 ml vµ mét èng nhá Durham. HÊp tiÖt khuÈn 121oC
trong 15 phót. B¶o qu¶n ë 4oC.
M«i
trêng láng Enterobacteria - Mossel
|
Genlatin pancreatic D-Glucose monohydrat MËt bß kh« Kali dihydrophosphat Dinatri hydrophosphat Xanh brilliant Níc cÊt |
10,0
g 5,0 g 20,0 g 2,0 g 8,0 g 15 mg 1000
ml |
§iÒu
chØnh pH sao cho sau khi ®un lµ 7,0 - 7,4. §un s«i trong 30 phót vµ lµm l¹nh
ngay.
M«i
trêng muèi mËt violet - red
|
Cao men bia Gelatin pancreatic Muèi mËt Lactose Natri clorid D-Glucose monohydrat §á trung tÝnh TÝm tinh thÓ Th¹ch Níc cÊt |
3,0 g 7,0 g 1,5 g 10,0
g 5,0 g 10,0
g 30 mg 2 mg 15.0
g 1000
ml |
§iÒu
chØnh pH sao cho sau khi ®un lµ 7,2 - 7,6. M«i trêng ®îc ®un s«i ®Ó tiÖt
trïng nhng kh«ng ®îc hÊp tiÖt trïng.
ChuÈn bÞ thÝ nghiÖm
LÊy mÉu:
§èi víi c¸c thö nghiÖm díi
®©y, mçi thö nghiÖm lÊy 10ml hoÆc 10g chÕ phÈm.
C¸ch
thö nghiÖm:
Mét mÉu chÕ phÈm cÇn x¸c ®Þnh
giíi h¹n vi khuÈn ph¶i thùc hiÖn ®Çy ®ñ c¸c thö nghiÖm sau:
§Õm tæng sè vi khuÈn hiÕu khÝ
sèng l¹i ®îc, tÝnh ra sè lîng vi khuÈn, nÊm mèc cã trong 1g hoÆc 1ml chÕ
phÈm.
Thö nghiÖm t×m nh÷ng vi khuÈn
g©y bÖnh sau:
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
Salmonella
Escherichia coli
ChuÈn
bÞ mÉu
ChÕ phÈm mang thö nghiÖm trong
qu¸ tr×nh hoµ tan hoÆc nhò ho¸ ph¶i ®¶m b¶o kh«ng lµm thay ®æi chñng lo¹i vi
khuÈn, nÊm mèc cã trong thuèc. §Ó cã mét dung dÞch hoÆc nhò dÞch thÝch hîp cho
thö nghiÖm, tiÕn hµnh
§èi víi chÕ phÈm r¾n, hoµ tan
trùc tiÕp hoÆc nghiÒn mÞn chÕ phÈm trong b×nh víi dung m«i hoÆc chÊt nhò ho¸
thÝch hîp.
§èi víi chÕ phÈm ë d¹ng láng
nh dung dÞch thùc, nhò dÞch trong níc, chÊt r¾n hßa tan dÔ dµng vµ hoµn toµn
trong níc..., dïng dung dÞch ®Öm phosphat pH 7,2 hoÆc dung dÞch natri clorid
0,9% ®Ó hoµ lo·ng.
Nh÷ng chÕ phÈm láng kh«ng thÓ
hoµ lÉn trong níc
C¸c chÕ phÈm ë d¹ng khÝ dung -
láng: Lµm l¹nh b×nh ®Ó c¸c khÝ ho¸ láng råi më n¾p ®Ó lÊy mét lîng thÝch hîp
mang thö.
§Õm tæng sè vi khuÈn hiÕu khÝ:
§èi víi chÕ phÈm hoµ tan tèt
hoÆc t¹o thµnh dung dÞch h¬i ®ôc, dïng ph¬ng ph¸p ®Üa th¹ch. Cßn c¸c chÕ phÈm kh¸c
dïng ph¬ng ph¸p hoµ lo·ng trong èng nghiÖm.
Hoµ tan hoÆc lµm nhò ho¸ 10 g
hoÆc 10 ml chÕ phÈm võa ®ñ trong 100 ml dung dÞch ®Öm phosphat pH 7,2 hoÆc
trong 100 ml dung m«i thÝch hîp víi tõng lo¹i chÕ phÈm, ®Ó ®îc dung dÞch chÕ
phÈm cã ®é pha lo·ng ë tû lÖ 1/10. §èi víi nh÷ng chÕ phÈm d¹ng nhÇy kh«ng thÓ
lÊy chÝnh x¸c b»ng pipet ë tû lÖ 1/10, cã thÓ pha lo·ng tiÕp ®Ó lÊy ®îc chÝnh
x¸c, nghÜa lµ cã thÓ pha lo·ng ®Õn tû lÖ 1/50 hoÆc 1/100 v.v...
Thùc hiÖn thö nghiÖm ph¸t hiÖn
chÊt øc chÕ tríc khi x¸c ®Þnh tæng sè vi khuÈn hiÕu khÝ. ChÕ phÈm ®· pha lo·ng
ph¶i cho ngay vµo m«i trêng nu«i cÊy mµ kh«ng ®îc ®Ó qu¸ 1 giê.
Dung dÞch ®Öm pH 7,2: Hoµ 34g
kali dihydrophosphat (KH2PO4) vµo kho¶ng 500 ml níc cÊt
trong b×nh ®Þnh møc 1000 ml. §iÒu chØnh pH tíi 7,2 + 0,1 b»ng c¸ch thªm
dung dÞch natri hydroxyd 2%. Thªm níc cÊt tíi v¹ch. Trén ®Òu, ph©n chia vµo
c¸c b×nh, tiÖt khuÈn, b¶o qu¶n ë l¹nh. Khi dïng, hoµ lo·ng víi níc cÊt theo tû
lÖ 1: 800 vµ tiÖt khuÈn.
a) Ph¬ng ph¸p ®Üa th¹ch
Hoµ lo·ng chÕ phÈm sao cho khi
cÊy 1 ml dÞch chÕ phÈm vµo m«i trêng trong mét hép Petri, sè khuÈn l¹c mäc
kho¶ng 30 ®Õn 300 khuÈn l¹c. LÊy dung dÞch cã ®é pha lo·ng cuèi cïng cho vµo 2
hép Petri, mçi hép 1ml. Thªm vµo mçi hép 15 - 20 ml m«i trêng th¹ch casein ®Ëu
t¬ng hoÆc m«i trêng th¹ch thêng ®· ®un ch¶y vµ ®Ó nguéi ®Õn 45oC.
§Ëy hép, trén ®Òu b»ng c¸ch xoay qua, xoay l¹i. Sau ®ã ®Ó yªn cho th¹ch ®«ng
cøng ë nhiÖt ®é phßng. LËt ngîc hép, mang ñ ë 35oC tõ 24 - 48 h.
Sau thêi gian ñ, kiÓm tra vi khuÈn mäc ë
®Üa, ®Õm sè lîng khuÈn l¹c. LÊy gi¸ trÞ cña ®Üa cã sè lîng khuÈn l¹c lín nhÊt
mµ sè khuÈn l¹c trong ®Üa kh«ng lín h¬n 300 vµ tÝnh ra sè lîng khuÈn l¹c trong
1g hoÆc 1ml chÕ phÈm. NÕu thÊy kh«ng cã khuÈn l¹c mäc ë ®Üa cã ®é pha lo·ng
1/10 th× kÕt luËn chÕ phÈm cã Ýt h¬n 10 khuÈn l¹c trong 1 g hoÆc 1 ml.
b) Ph¬ng ph¸p pha lo·ng trong èng nghiÖm
Cho vµo 14 èng nghiÖm cì th«ng
thêng, mçi èng 9,0 ml m«i trêng láng casein ®Ëu t¬ng. LÊy mét d·y 12 èng
chia thµnh 4 l«, mçi l« 3 èng. Dïng mét l« 3 èng ®Ó kiÓm tra.
Thªm vµo l« 1 gåm 3 èng vµ mét
èng thø 4 (èng A) 1 g (hoÆc1 ml) chÕ
phÈm vµ trén ®Òu.
Thªm vµo l« 2 gåm 3 èng vµ mét
èng thø 4 (èng B) 1 ml dung dÞch lÊy tõ èng A vµ trén ®Òu.
Thªm vµo l« 3 gåm 3 èng, mçi
èng 1 ml dung dÞch lÊy tõ èng B vµ trén ®Òu.
Bá kh«ng sö dông èng A vµ èng
B.
Theo c¸ch pha trªn cã l« 1, l«
2, l« 3, t¬ng øng víi lîng chÕ phÈm lµ: 100; 10; vµ 1 mg hoÆc ml trong
mçi èng. §Ëy kÝn c¸c èng mang ñ ë 32 - 35oC trong 24 giê, quan s¸t
vi khuÈn mäc ë c¸c èng chøa chÕ phÈm, mang ®èi chiÕu víi b¶ng 1 ®Ó biÕt sè
lîng vi khuÈn cã trong 1 g hoÆc 1ml chÕ phÈm.
B¶ng 1: Tæng sè vi khuÈn trong chÕ
phÈm.
|
Sè mg
(hoÆc ml) chÕ phÈm cho mçi èng |
|
||||
|
|
100 |
10 |
1 |
Sè lîng vi khuÈn lín
nhÊt cã thÓ cã trong 1 g hoÆc 1 ml |
|
|
Sè èng cã vi
khuÈn mäc Sè èng cã vi khuÈn mäc |
3 3 3 3 |
3 3 3 3 |
3 2 1 0 |
>1100 1100 500 200 |
|
|
3 3 3 3 |
2 2 2 2 |
3 2 1 0 |
290 210 150 90 |
|
|
|
3 3 3 3 |
1 1 1 1 |
3 2 1 0 |
160 120 70 40 |
|
|
|
3 3 3 3 |
0 0 0 0 |
3 2 1 0 |
95 60 40 23 |
|
|
c)Phương pháp màng lọc:
Dùng các màng lọc có kích
thước lỗ lọc không lớn hơn 0,45 µm, có
khả năng giữ lại các vi khuẩn cần kiểm
tra. Chọn loại màng lọc làm bằng nguyên liệu
giữ lại vi khuẩn nhưng không ảnh hưởng
đến mẫu thử. Thí dụ có thể dùng màng
Cellulose nitrat để lọc các dung dịch nước,
dầu và cồn thấp độ. Dùng màng cellulose acetat
để lọc dung dịch cồn cao độ. Dùng
hệ thống lọc có thiết kế cho phép chuyển
được màng lọc vào môi trường nuôi cấy.
Chuyển
một lượng thích hợp dung dịch mẫu thử
đã pha theo mục “Chuẩn bị mẫu”, (Tốt
nhất là lấy một lượng dung dịch mẫu
đã chuẩn bị tương đương với 1g
hoặc 1ml mẫu cần thử; nếu lượng vi
khuẩn có nhiều trong mẫu thử, có thể lấy
lượng dung dịch mẫu ít hơn). Mỗi mẫu
thử cần 2 màng lọc, dung dịch mẫu thử
đã chuẩn bị phải lọc ngay qua màng. Rửa màng
lọc 3 lần, mỗi lần khoảng 100ml dung dịch
thích hợp như dung dịch đệm natri clorid – pepton
pH 7,0. Khi cần có thể thêm
chất hoạt động bề mặt như polysorbat 80
hoặc các chất khử hoạt tính của các chất
kháng khuẩn vào dung dịch dùng để rửa. Cũng
có thể rửa màng với số lần ít hơn, nếu
thấy đủ loại hết thuốc và tác nhân ảnh
hưởng đến kết quả thử nghiệm
khỏi màng. Chuyển một màng lọc lên môi
trường thạch dùng phát hiện vi khuẩn. Ủ
ở 30° to 35°C, theo dõi, đếm số vi khuẩn mọc
trên màng. Chuyển màng lọc còn lại lên mặt môi
trường phát hiện nấm. Ủ ở 20° to 25°C, theo
dõi trong khoảng 5 ngày, đếm số nấm mọc trên
màng. Nếu chắc chắn về thời gian mọc
của nấm cần phát hiện thì có thể theo dõi,
đếm trong khoảng thời gian ngắn hơn.
Chọn đếm các
đĩa có số khuẩn lạc cao nhất ít hơn 100
khuẩn lạc trên màng. Tính số khuẩn lạc có trong 1
gam hoặc 1ml mẫu thử.
Mẫu thử là thuốc dạng miếng
đắp thấm qua da: Chuyển vô trùng 10 miếng dán vào
bình đã có sẵn 500 ml dung dịch đệm natri clorid –
pepton pH 7,0, Lắc đều trong 30 phút. Lọc qua 2 màng
lọc để tìm vi khuẩn và nấm mỗi màng 50ml dung dịch. Tiếp tục
ủ, theo dõi, đếm vi khuẩn và nấm mốc
như ở trên.
Thö nghiÖm t×m c¸c vi khuÈn
a) T×m
Staphylococcus aureus vµ Pseudomonas aeruginosa
Cho chÕ phÈm vµo 100 ml m«i
trêng láng casein ®Ëu t¬ng, ñ ë 35 - 370C, kiÓm tra vi khuÈn mäc ë m«i trêng. NÕu thÊy mäc, dïng
que cÊy lÊy m«i trêng, cÊy lªn ®Üa th¹ch Vogel - Johnson (hoÆc th¹ch Baird -
Parker hoÆc th¹ch manitol - muèi) vµ m«i trêng th¹ch cetrimid. §Ëy ®Üa, lËt
ngîc hép Petri, mang ñ. Sau khi ñ kiÓm tra nÕu kh«ng thÊy cã nh÷ng khuÈn l¹c
víi ®Æc tÝnh
*Ph¶n øng coagulase (®èi víi
Staphylococcus aureus):
Dïng que cÊy chuyÓn khuÈn l¹c
nghi ngê ®Æc trng tõ mÆt th¹ch
Vogel-Johnson (hoÆc th¹ch Baird - Parket, hoÆc th¹ch manitol - muèi)
thªm vµo tõng èng nghiÖm, mçi èng 0,5 ml huyÕt t¬ng thá hoÆc ngùa. §em ñ 37oC,
kiÓm tra c¸c èng sau 3 giê ñ råi tiÕp
tôc ñ thªm 24h. NÕu thÊy cã ®«ng huyÕt t¬ng (ë bÊt kú møc ®é nµo), chÕ phÈm cã
Staphylococcus aureus.
B¶ng 2: §Æc ®iÓm h×nh th¸i cña
Staphylococcus aureus trªn c¸c m«i trêng lùa chän
|
M«i
trêng |
Th¹ch Vogel - Johnson |
Th¹ch manitol - muèi |
Th¹ch Baird - Parker |
|
§Æc ®iÓm h×nh th¸i khuÈn l¹c |
Mµu ®en ®îc bao bäc b»ng mét
vïng vµng |
KhuÈn l¹c mµu vµng cïng víi
mét vïng vµng xung quanh |
KhuÈn l¹c mµu ®en bãng, viÒn
quanh b»ng mét vïng s¸ng râ 2 - 5 mm |
*Ph¶n øng oxydase vµ sinh s¾c tè ( ®èi víi Pseudomonas
aeruginosa):
LÊy nh÷ng khuÈn l¹c nghi ngê
®Æc trng tõ mÆt m«i trêng th¹ch cetrimid cÊy ria trªn mÆt m«i trêng th¹ch
Pseudomonas ph¸t hiÖn Fluorescin vµ m«i trêng
Pseudomonas ph¸t hiÖn Pyocyanin trong hép Petri. NÕu nhiÒu khuÈn l¹c cÇn
®îc cÊy truyÒn, cã thÓ chia bÒ mÆt hép thµnh bèn phÇn, mçi phÇn cÊy mét lo¹i khuÈn
l¹c lùa chän. §Ëy vµ lËt ngîc hép m«i trêng ®· cÊy truyÒn vµ ñ ë 35 +
2oC Ýt nhÊt 3 ngµy kiÓm tra ®êng cÊy díi ¸nh s¸ng ®Ìn tö ngo¹i.
KiÓm tra c¸c ®Üa ®Ó x¸c ®Þnh cã khuÈn l¹c ®Æc trng theo b¶ng 3 hay kh«ng. X¸c
nhËn bÊt kú khuÈn l¹c nghi ngê nµo mäc trªn mét hoÆc nhiÒu m«i trêng. Ph¸t
hiÖn Pseudomonas aeruginosa b»ng ph¶n øng oxydase: Nhá
ngay lªn khuÈn l¹c hoÆc chuyÓn khuÈn l¹c lªn mét mÈu (hoÆc mét khoanh) giÊy ®·
tÈm tríc N - dimethyl - phenylen diamin dihydroclorid. NÕu thÊy hiÖn mµu ®á hång
chuyÓn sang mµu tÝm, chÕ phÈm cã Pseudomonas aeruginosa. Cã thÓ x¸c ®Þnh Pseudomonas
aeruginosa b»ng c¸c phÐp thö sinh ho¸ vµ nu«i cÊy thÝch hîp kh¸c.
B¶ng 3.
§Æc ®iÓm h×nh th¸i cña Pseudomonas
aeruginosa trªn c¸c m«i trêng lùa chän
|
M«i
trêng |
Th¹ch
cetrimid |
Th¹ch
Pseudomonas ®Ó ph¸t hiÖn Fluorescin |
Th¹ch
Pseudomonas ®Ó ph¸t hiÖn Pyocyanin |
|
§Æc ®iÓm h×nh th¸i khuÈn l¹c |
Mµu lôc nh¹t th«ng thêng |
Kh«ng mµu ®Õn mµu vµng nh¹t |
Mµu vµng nh¹t |
|
Huúnh quang ë ¸nh s¸ng tia
cùc tÝm |
Mµu
lôc |
Mµu
h¬i vµng |
Mµu xanh níc biÓn |
|
Ph¶n øng oxydase |
D¬ng
tÝnh |
D¬ng
tÝnh |
D¬ng
tÝnh |
|
Nhuém Gram |
Trùc
khuÈn Gram ©m |
Trùc
khuÈn Gram ©m |
Trùc
khuÈn Gram ©m |
b) T×m Salmonella vµ
Escherichia coli
Cho chÕ phÈm vµo kho¶ng 100 ml
m«i trêng láng lactose, ñ. KiÓm tra nÕu cã vi khuÈn mäc, l¾c nhÑ nhµng. LÊy
1ml cho vµo mét èng chøa s½n 10 ml hçn hîp m«i trêng láng selenit - cystin vµ
m«i trêng láng tetrathionat, trén ®Òu, ñ trong 18 - 24 h. PhÇn cßn l¹i cña m«i
trêng lactose sÏ dïng ®Ó t×m Escherichia coli.
T×m Salmonella: LÊy mét quai cÊy tõ canh thang
selenit cystin vµ tetrathionat ria lªn mÆt m«i trêng th¹ch xanh brilliant, m«i
trêng th¹ch bismuth sulfit trong c¸c ®Üa Petri. §Ëy ®Üa, lËt ngîc, ñ. KiÓm
tra, nÕu kh«ng thÊy cã khuÈn l¹c d¹ng
B¶ng 4. §Æc ®iÓm h×nh th¸i cña Salmonella
trªn m«i trêng lùa chän
|
M«i
trêng |
M« t¶
khuÈn l¹c |
|
Th¹ch xanh brilliant |
KhuÈn l¹c kh«ng mµu hoÆc mµu
hång nh¹t tíi tr¾ng ®ôc, nhá, râ nÐt (thêng bao quanh b»ng mét vïng mµu hång
tíi ®á) |
|
Th¹ch xylose - lysin - desoxycholat |
KhuÈn l¹c mµu ®á, cã thÓ chÊm
®en ë trung t©m |
|
Th¹ch bismuth sulfit |
KhuÈn l¹c mµu ®en hoÆc mµu
xanh |
NÕu thÊy khuÈn l¹c, ®em nhuém
soi thÊy gåm nh÷ng trùc khuÈn h×nh gËy, Gram ©m phï hîp víi m« t¶ ë b¶ng 4,
thùc hiÖn tiÕp b»ng c¸ch chuyÓn khuÈn l¹c nghi ngê riªng biÖt sang èng m«i
trêng th¹ch - s¾t - ba ®êng (nghiªng). Tríc tiªn cÊy ria trªn mÆt th¹ch
nghiªng, sau cÊy s©u xuèng phÇn ®øng cña th¹ch, ñ. KiÓm tra kh«ng thÊy m«i trêng bÞ kiÒm ho¸ (mµu ®á) ở phÇn nghiªng vµ acid ho¸ (mµu
vµng) phÇn dùng ®øng, cã hoÆc kh«ng cã kÌm theo mµu ®en ë phÇn dùng ®øng do
sinh H2S. ChÕ phÈm kh«ng chøa c¸c nßi Salmonella.
T×m Escherichia coli:
CÊy ria mét quai cÊy tõ m«i
trêng lactose ®· cã vi khuÈn mäc ë trªn bÒ mÆt m«i trêng th¹ch Mac - Conkey.
§Ëy n¾p, lËt ngîc hép, ñ. KiÓm tra nÕu kh«ng cã khuÈn l¹c phï hîp víi m« t¶ ë
b¶ng 5 th× chÕ phÈm kh«ng cã Escherichia
coli. NÕu cã khuÈn l¹c phï hîp víi m« t¶ ë b¶ng 5 th× chuyÓn khuÈn
l¹c nghi ngê lªn mÆt th¹ch Levine - eosin - xanh methylen trong c¸c ®Üa Petri .
NÕu cã nhiÒu khuÈn l¹c nghi ngê, chia ®Üa thµnh 4 phÇn, mçi phÇn cÊy mét lo¹i
khuÈn l¹c ®· lùa chän. §Ëy ®Üa, lËt ngîc, ñ. KiÓm tra nÕu kh«ng cã nh÷ng khuÈn
l¹c thÓ hiÖn c¶ hai ®Æc tÝnh ¸nh kim díi ¸nh s¸ng ph¶n chiÕu, vµ mµu ®en xuÊt
hiÖn ë ¸nh s¸ng truyÒn qua, mÉu chÕ phÈm kh«ng cã Escherichia coli. KÕt hîp
c¸c ph¶n øng thö nghiÖm sinh ho¸ vµ ®Æc ®iÓm nu«i cÊy ®Ó kÕt luËn sù cã mÆt cña
Escherichia coli trong chÕ phÈm.
B¶ng 5: §Æc ®iÓm h×nh th¸i cña Escherichia coli trªn th¹ch Mac - Conkey
|
§Æc ®iÓm h×nh th¸i khuÈn l¹c |
KhuÈn l¹c mµu ®á g¹ch, cã thÓ
cã vïng mËt kÕt tña bao quanh |
|
Nhuém Gram |
Trùc khuÈn Gram ©m |
c) Ph¸t
hiÖn Enterobacteria vµ c¸c vi khuÈn Gram ©m kh¸c
Lµm
®ång nhÊt chÕ phÈm ®em kiÓm tra b»ng c¸ch xö lý mét lîng thÝch hîp nh ®· m«
t¶ ë phÇn chÕ t¹o mÉu thö nghiÖm vµ ñ ë 35 - 37oC mét thêi gian thÝch hîp (thêng tõ 2 - 5 h)
trong m«i trêng canh thang lactose ®Ó phôc håi l¹i vi khuÈn mµ kh«ng lµm t¨ng vi khuÈn. L¾c b×nh chøa vµ
chuyÓn mét lîng ®· ®ång nhÊt cña chÕ phÈm t¬ng ®¬ng kho¶ng 1 g hoÆc 1 ml chÕ phÈm vµo 100 ml m«i trêng láng Enterobacteria - Mossel vµ ñ
ë 35 - 37oC trong 18 - 24 h. CÊy lªn ®Üa th¹ch muèi mËt violet-red
cã chøa lactose vµ glucose ñ ë 35 -37oC trong 18 - 48 h. ChÕ phÈm kh«ng cã Enterobacteria nÕu kh«ng thÊy mäc nh÷ng
khuÈn l¹c vi khuÈn Gram ©m trªn ®Üa.
§¸nh
gi¸ sè lîng: ñ mét lîng thÝch hîp m«i trêng láng Enterobacteria - Mossel
víi nh÷ng lîng chÕ phÈm ®em kiÓm tra ®· ®îc lµm ®ång nhÊt chøa 1,0 g; 0,1 g
vµ 10 mg hoÆc 1,0 ml; 0,1 ml vµ
10 ml. NÕu cÇn cã thÓ pha lo·ng chÕ phÈm, ñ ë 35 -37oC
trong 24 - 48 h. C¸c khuÈn l¹c ®· ph¸t
triÓn tèt thêng ®á hoÆc ®Üa ®á, nhuém vi khuÈn b¾t mµu Gram ©m, chøng tá kÕt
qu¶ d¬ng tÝnh. Ghi lîng nhá nhÊt cña chÕ phÈm mµ ë ®ã cho kÕt qu¶ d¬ng
tÝnh vµ lîng lín nhÊt cña chÕ phÈm mµ ë ®ã cho kÕt qu¶ ©m tÝnh. X¸c ®Þnh sè lîng
Bacteria theo b¶ng 6.
B¶ng 6. TÝnh lîng Bacteria trong chÕ phÈm
|
KÕt qu¶ ®èi víi mçi lîng
s¶n phÈm |
Sè
Bacteria cã
trong 1 gam s¶n phÈm |
||
|
1,0 g
hoÆc 1 ml |
0,1 g
hoÆc 0,1
ml |
0,01
g hoÆc 0,01 ml |
|
|
+ |
+ |
+ |
Lín
h¬n 102 |
|
+ |
+ |
- |
Ýt
h¬n 102 nhng lín h¬n 10 |
|
+ |
- |
- |
Ýt
h¬n 10 nhng lín h¬n 1 |
|
- |
- |
- |
Ýt h¬n 1 |
§Õm tæng sè nÊm, mèc, vµ men
Dïng ph¬ng ph¸p ®Üa th¹ch
t¬ng tù
T×m Clostridia
Thö nghiÖm thø nhÊt dïng cho
nh÷ng s¶n phÈm qui ®Þnh kh«ng cã Clostridia.
Thö nghiÖm thø hai lµ b¸n ®Þnh lîng ®èi víi Clostridium perfringens áp dụng víi
nh÷ng s¶n phÈm cã tiªu chuÈn vÒ sè lîng Clostridium
perfringens.
Thö nghiÖm t×m Clostridia
ChuÈn bÞ mÉu thö
Khi thÊy vi khuÈn mäc, chän mét
khuÈn l¹c ®iÓn h×nh cÊy chuyÓn sang m«i trêng th¹ch
§Õm Clostridium perfringens
T¹o mÉu thö
C¸c èng cã mµu ®en (s¾t sulfid)
vµ sinh h¬i trong èng
Nh÷ng nßi vi khuÈn dïng ®Ó kiÓm
tra:
Thö nghiÖm thø 1: Clostridium
sporogenes ATCC 19404 vµ NCTC 532
Thö nghiÖm thø 2: Clostridium
perfringens ATCC 13124 vµ NCTC 6125
NÕu cÇn, kÕt hîp víi dïng Clostridium perfringens ®Ó kiÓm tra ®iÒu kiÖn nh¹y c¶m vµ ®iÒu kiÖn
kþ khÝ.
LÆp l¹i thÝ nghiÖm
Khi nghi ngê, cÇn ®îc thö nghiÖm l¹i
Yªu cÇu giíi h¹n nhiÔm khuÈn
NÕu kh«ng cã chØ dÉn trong chuyªn luËn riªng th×
giíi h¹n nhiÔm khuÈn cho c¸c lo¹i thuèc cã qu¸ tr×nh s¶n xuÊt kh«ng tiÖt khuÈn
nh sau:
B¶ng 7.
Yªu cÇu giíi h¹n nhiÔm khuÈn
|
Møc |
Lo¹i chÕ phÈm |
Yªu cÇu |
|
1 |
C¸c chÕ phÈm dïng cho báng vµ
c¸c vÕt loÐt s©u |
Kh«ng cã c¸c vi khuÈn cã thÓ
sèng l¹i trong 1 g (ml) mÉu thö |
|
2 |
C¸c chÕ phÈm dïng t¹i chç |
Tæng sè vi khuÈn hiÕu khÝ
sèng l¹i ®uîc kh«ng qu¸ 100 trong 1 g (ml) MÉu
thö ph¶i kh«ng cã Enterobacteria,
Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, nÊm vµ mèc trong 1 g (ml) |
|
3 |
C¸c chÕ phÈm dïng t¹i chç cho
da |
Tæng sè vi khuÈn hiÕu khÝ
sèng l¹i ®îc kh«ng qu¸ 500 trong 1 g (ml) MÉu thö ph¶i kh«ng cã Enterobacteria, Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus aureus, nÊm vµ mèc trong 1 g (ml) |
|
4 |
C¸c chÕ phÈm dïng uèng; qua
trùc trµng; thÊm qua da. |
Tæng sè vi khuÈn hiÕu khÝ
sèng l¹i ®îc kh«ng qu¸ 104 trong 1 g (ml) Tèng sè Enterobacteria kh«ng qu¸ 500 trong 1 g (ml) NÊm vµ mèc kh«ng qu¸ 100
trong1 g (ml) Kh«ng ®îc cã Salmonella
trong 10 g(ml) MÉu kh«ng cã Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus aureus. trong 1g(ml) |
|
5 |
C¸c chÕ phÈm cã chøa c¸c
nguyªn liÖu cã nguån gèc thùc vËt, ®éng vËt kh«ng thÓ xö lÝ theo qui tr×nh
lµm gi¶m lîng vi khuÈn. |
Tæng sè vi khuÈn hiÕu khÝ
sèng l¹i ®îc 5.104 trong 1 g (ml) NÊm vµ mèc kh«ng qu¸ 500
trong 1 g (ml) Tèng sè Enterobacteria kh«ng qu¸ 500 trong1 g (ml) Kh«ng ®îc cã Salmonella
trong 10 g(ml) MÉu kh«ng cã Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa,
Staphylococcus aureus trong 1g(ml) |